A osteoartrite (OA) é unha das enfermidades crónicas dexenerativas das articulacións óseas a longo prazo que afecta á poboación maior de 65 anos.
1]. En xeral, os pacientes con OA son diagnosticados con cartilaxe danada, sinovial inflamada e condrocitos erosionados, que provocan dor e angustia física.
2]. A dor artrítica é causada principalmente pola dexeneración da cartilaxe nas articulacións por inflamación e, cando a cartilaxe está seriamente danada, os ósos poden chocar entre si causando dor insoportable e dificultades físicas.
3]. A implicación de mediadores inflamatorios con síntomas como dor, inchazo e rixidez da articulación está ben documentada. Nos pacientes con artrosis, as citocinas inflamatorias, que causan a erosión da cartilaxe e do óso subcondral atópanse no líquido sinovial.
4]. Dúas queixas principais que teñen os pacientes con artrosis xeralmente son a dor e a inflamación sinovial. Polo tanto, os obxectivos principais das terapias actuais para OA son reducir a dor e a inflamación. [
5]. Aínda que os tratamentos dispoñibles para OA, incluíndo medicamentos non esteroides e esteroides, demostraron a súa eficacia para aliviar a dor e a inflamación, os usos a longo prazo destes medicamentos teñen graves consecuencias para a saúde, como disfuncións cardiovasculares, gastrointestinais e renales.
6]. Así, hai que desenvolver un medicamento máis eficaz e con menos efectos secundarios para o tratamento da artrose.
Os produtos de saúde naturais están sendo cada vez máis populares por ser seguros e facilmente dispoñibles.
7]. Os medicamentos tradicionais coreanos demostraron a súa eficacia contra varias enfermidades inflamatorias, incluída a artrite.
8]. Aucklandia lappa DC. é coñecida polas súas propiedades medicinais, como mellorar a circulación do qi para aliviar a dor e calmar o estómago, e utilizouse tradicionalmente como analxésico natural.
9]. Informes anteriores suxiren que A. lappa posúe antiinflamatorio [
10,
11], analxésico [
12], anticanceroso [
13] e gastroprotector [
14] efectos. As diversas actividades biolóxicas de A. lappa están causadas polos seus principais compostos activos: costunolida, lactona dehidrocostus, dihidrocostunolida, costuslactona, α-costol, lactona saussurea e costuslactona.
15]. Estudos anteriores afirman que a costunolida mostrou propiedades antiinflamatorias nos lipopolisacáridos (LPS), que inducían os macrófagos a través da regulación do NF-kB e da vía da proteína de choque térmico.
16,
17]. Non obstante, ningún estudo investigou as actividades potenciais de A. lappa para o tratamento da OA. A presente investigación investigou os efectos terapéuticos de A. lappa contra a OA utilizando modelos de roedores MIA (iodoacetato monosódico) e ácido acético.
O iodoacetato monosódico (MIA) é famoso para producir gran parte dos comportamentos de dor e as características fisiopatolóxicas da OA en animais.
18,
19,
20]. Cando se inxecta nas articulacións do xeonllo, o MIA desordena o metabolismo dos condrocitos e induce inflamación e síntomas inflamatorios, como a erosión do óso subcondral e da cartilaxe, os síntomas cardinais da OA.
18]. A resposta de contorsión inducida co ácido acético é amplamente considerada como a simulación da dor periférica en animais onde a dor inflamatoria pode medirse cuantitativamente.
19]. A liña celular de macrófagos de rato, RAW264.7, úsase popularmente para estudar as respostas celulares á inflamación. Tras a activación con LPS, os macrófagos RAW264 activan vías inflamatorias e segregan varios intermediarios inflamatorios, como TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS e IL-6.
20]. Este estudo avaliou os efectos antinociceptivos e antiinflamatorios de A. lappa contra a OA en modelo animal MIA, modelo animal inducido por ácido acético e células RAW264.7 activadas por LPS.
2. Materiais e Métodos
2.1. Material vexetal
A raíz seca de A. lappa DC. usado no experimento foi adquirido de Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seúl, Corea). Foi identificado polo profesor Donghun Lee, Departamento de Farmacoloxía Herbal, Coronel de Medicina Coreana, Universidade de Gachon, e o número de mostra do vale depositouse como 18060301.
2.2. Análise HPLC do extracto de A. lappa
A. lappa extraeuse mediante un aparello de refluxo (auga destilada, 3 h a 100 °C). A solución extraída filtrouse e condensouse mediante un evaporador a baixa presión. O extracto de A. lappa tivo un rendemento do 44,69 % despois da liofilización a menos de -80 °C. A análise cromatográfica de A. lappa realizouse cun HPLC conectado mediante un sistema HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, EUA). Para a separación cromática utilizouse a columna EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) a 35 °C. Diluíronse un total de 100 mg da mostra en 10 mL de metanol ao 50% e sonicábanse durante 10 min. As mostras filtráronse cun filtro de xiringa (Waters Corp., Milford, MA, EUA) de 0,45 μm. A composición da fase móbil era 0,1% de ácido fosfórico (A) e acetonitrilo (B) e a columna eluíuse do seguinte xeito: 0-60 min, 0%; 60-65 min, 100 %; 65-67 min, 100 %; 67–72 min, 0% disolvente B cun caudal de 1,0 ml/min. O efluente observouse a 210 nm utilizando un volume de inxección de 10 μL. A análise realizouse por triplicado.
2.3. Aloxamento e xestión de animais
Adquiríronse ratos machos Sprague-Dawley (SD) de 5 semanas de idade e ratos ICR machos de 6 semanas en Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Corea). Os animais mantivéronse nunha habitación a temperatura constante (22 ± 2 °C) e humidade (55 ± 10%) e un ciclo de luz/escuridade de 12/12 h. Os animais estiveron familiarizados coa condición durante máis dunha semana antes de comezar o experimento. Os animais tiñan un abastecemento ad libitum de penso e auga. As regras éticas actuais para o coidado e o manexo dos animais na Universidade de Gachon (GIACUC-R2019003) foron estrictamente seguidas en todos os procedementos experimentais con animais. O estudo foi deseñado para o investigador cego e ensaio paralelo. Seguimos o método da eutanasia segundo as directrices do Comité de Ética Experimental Animal.
2.4. MIA Inxección e Tratamento
As ratas separáronse aleatoriamente en 4 grupos, a saber, simulado, control, indometacina e A. lappa. Estando anestesiados cunha mestura de isofluorano O2 ao 2%, as ratas foron inxectadas usando 50 μl de MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) intraarticularmente nas articulacións do xeonllo para levar a OA experimental. Os tratamentos realizáronse do seguinte xeito: os grupos control e simulados mantivéronse só coa dieta básica AIN-93G. Só, o grupo de indometacina recibiu indometacina (3 mg/kg) incorporada á dieta AIN-93G e o grupo de A. lappa 300 mg/kg foi asignado á dieta AIN-93G complementada con A. lappa (300 mg/kg). Os tratamentos continuaron durante 24 días desde o día da indución da OA a razón de 15-17 g por 190-210 g de peso corporal nunha base diaria.
2.5. Medición de peso
Despois da indución de OA, realizouse a medición da capacidade de soportar peso das extremidades posteriores das ratas co incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, EUA) tal e como estaba programado. Calculouse a distribución do peso nas extremidades posteriores: capacidade de soportar peso (%)
