A osteoartrite (OA) é unha das enfermidades óseas e articulares dexenerativas crónicas de longa duración que afecta á poboación maior de 65 anos [
1]. Xeralmente, os pacientes con artrose son diagnosticados con cartilaxe danada, sinovia inflamada e condrocitos erosionados, o que provoca dor e malestar físico [
2]. A dor artrítica está causada principalmente pola dexeneración da cartilaxe nas articulacións por inflamación e, cando a cartilaxe está gravemente danada, os ósos poden chocar entre si causando dor insoportable e dificultades físicas [
3]. A implicación de mediadores inflamatorios con síntomas como dor, inchazo e rixidez da articulación está ben documentada. Nos pacientes con artrose, as citocinas inflamatorias, que causan a erosión da cartilaxe e do óso subcondral, atópanse no líquido sinovial [
4]. Dúas das principais queixas que adoitan ter os pacientes con artrose son a dor e a inflamación sinovial. Polo tanto, os obxectivos principais das terapias actuais para a artrose son reducir a dor e a inflamación. [
5]. Aínda que os tratamentos dispoñibles para a artrose, incluídos os fármacos non esteroideos e esteroideos, demostraron a súa eficacia para aliviar a dor e a inflamación, o uso a longo prazo destes fármacos ten graves consecuencias para a saúde, como disfuncións cardiovasculares, gastrointestinais e renais [
6]. Polo tanto, é preciso desenvolver un medicamento máis eficaz con menos efectos secundarios para o tratamento da osteoartrite.
Os produtos de saúde naturais son cada vez máis populares por seren seguros e facilmente dispoñibles [
7]. As medicinas tradicionais coreanas demostraron a súa eficacia contra varias enfermidades inflamatorias, incluída a artrite [
8]. A Aucklandia lappa DC. é coñecida polas súas propiedades medicinais, como mellorar a circulación do qi para aliviar a dor e suavizar o estómago, e utilizouse tradicionalmente como analxésico natural [
9]. Informes previos suxiren que A. lappa posúe propiedades antiinflamatorias [
10,
11], analxésico [
12], anticanceríxeno [
13] e gastroprotector [
14] efectos. As diversas actividades biolóxicas de A. lappa son causadas polos seus principais compostos activos: costunólida, lactona de deshidrocostus, dihidrocostunólida, costuslactona, α-costol, lactona de saussurea e costuslactona [
15]. Estudos anteriores afirman que a costunólida mostrou propiedades antiinflamatorias no lipopolisacárido (LPS), que induciu os macrófagos mediante a regulación da vía NF-kB e da proteína de choque térmico [
16,
17]. Non obstante, ningún estudo investigou as posibles actividades de A. lappa para o tratamento da OA. A presente investigación investigou os efectos terapéuticos de A. lappa contra a OA utilizando MIA (iodoacetato monosódico) e modelos de roedores inducidos por ácido acético.
O iodoacetato monosódico (MIA) úsase de xeito coñecido para producir moitos dos comportamentos de dor e as características fisiopatolóxicas da artrose nos animais.
18,
19,
20]. Cando se inxecta nas articulacións do xeonllo, a MIA altera o metabolismo dos condrocitos e induce inflamación e síntomas inflamatorios, como a erosión da cartilaxe e do óso subcondral, os síntomas principais da artrose [
18]. A resposta de contorsión inducida con ácido acético considérase amplamente como a simulación da dor periférica en animais, onde a dor inflamatoria pode medirse cuantitativamente [
19]. A liña celular de macrófagos de rato, RAW264.7, úsase popularmente para estudar as respostas celulares á inflamación. Tras a activación con LPS, os macrófagos RAW264 activan vías inflamatorias e segregan varios intermediarios inflamatorios, como TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS e IL-6 [
20]. Este estudo avaliou os efectos antinociceptivos e antiinflamatorios de A. lappa contra a OA en modelos animais con MIA, modelos animais inducidos por ácido acético e células RAW264.7 activadas por LPS.
2. Materiais e métodos
2.1. Material vexetal
A raíz seca de *A. lappa DC.* empregada no experimento obtívose de Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seúl, Corea). Foi identificada polo profesor Donghun Lee, do Departamento de Farmacoloxía Herbal da Escola de Medicina Coreana da Universidade de Gachon, e o número de mostra do comprobante depositouse como 18060301.
2.2. Análise por HPLC do extracto de A. lappa
A. lappa extraeuse cun aparello de refluxo (auga destilada, 3 h a 100 °C). A solución extraída filtrouse e condensouse cun evaporador de baixa presión. O extracto de A. lappa tivo un rendemento do 44,69 % despois da liofilización a −80 °C. A análise cromatográfica de A. lappa realizouse cunha HPLC conectada mediante un sistema HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, EUA). Para a separación cromática, utilizouse unha columna EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) a 35 °C. Diluíronse un total de 100 mg da mostra en 10 mL de metanol ao 50 % e sonicouse durante 10 min. As mostras filtráronse cun filtro de xiringa (Waters Corp., Milford, MA, EUA) de 0,45 μm. A composición da fase móbil foi de ácido fosfórico (A) ao 0,1 % e acetonitrilo (B) e a columna eluíuse do seguinte xeito: 0–60 min, 0 %; 60–65 min, 100 %; 65–67 min, 100 %; 67–72 min, 0 % de solvente B cun caudal de 1,0 mL/min. O efluente observouse a 210 nm cun volume de inxección de 10 μL. A análise realizouse por triplicado.
2.3. Aloxamento e xestión de animais
As ratas Sprague-Dawley (SD) macho de 5 semanas e os ratos ICR macho de 6 semanas foron adquiridos de Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Corea). Os animais mantivéronse nunha habitación con temperatura constante (22 ± 2 °C) e humidade (55 ± 10 %) e un ciclo de luz/escuridade de 12/12 h. Os animais estiveron familiarizados coas condicións durante máis dunha semana antes de que comezase o experimento. Os animais tiñan un subministro ad libitum de penso e auga. As normas éticas vixentes para o coidado e manexo de animais na Universidade de Gachon (GIACUC-R2019003) seguíronse estritamente en todos os procedementos de experimentación con animais. O estudo foi deseñado con cego para o investigador e ensaios paralelos. Seguimos o método de eutanasia segundo as directrices do Comité de Ética de Experimentación Animal.
2.4. Inxección e tratamento de MIA
As ratas separáronse aleatoriamente en 4 grupos, concretamente, grupo simulado, grupo control, grupo indometacina e grupo A. lappa. Tras ser anestesiadas cunha mestura de isofluorano O2 ao 2 %, inxectóuselles 50 μL de MIA (40 mg/m²; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) por vía intraarticular nas articulacións do xeonllo para provocar unha artrosis experimental. Os tratamentos realizáronse do seguinte xeito: os grupos control e o grupo simulado mantivéronse só coa dieta básica AIN-93G. Só ao grupo de indometacina proporcionóuselle indometacina (3 mg/kg) incorporada á dieta AIN-93G e ao grupo de A. lappa con 300 mg/kg asignóuselle unha dieta AIN-93G suplementada con A. lappa (300 mg/kg). Os tratamentos continuaron durante 24 días desde o día da indución da artrosis a unha taxa de 15-17 g por cada 190-210 g de peso corporal diario.
2.5. Medición da capacidade de soporte de peso
Despois da indución da OA, realizouse unha medición da capacidade de soporte de peso das extremidades traseiras das ratas co incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, EUA) segundo o programado. Calculouse a distribución do peso nas extremidades traseiras: capacidade de soporte de peso (%)
